Rag₂基因缺失小鼠不能產(chǎn)生成熟的淋巴細胞?？蒲腥藛T利用胚胎干細胞（ES細胞）對Rag₂基因缺失小鼠進行基因治療。其技術(shù)流程如圖：

（1）步驟①中，在核移植前應(yīng)去除卵母細胞的

細胞核

細胞核

。
（2）步驟②中，重組胚胎培養(yǎng)到

囊胚

囊胚

期時，可從

內(nèi)細胞團

內(nèi)細胞團

分離出ES細胞。
（3）步驟③中，需要構(gòu)建含有基因Rag₂的表達載體。可以利用

PCR技術(shù)

PCR技術(shù)

擴增Rag₂基因片段。用HindⅢ和PstⅠ限制酶分別在片段兩側(cè)進行酶切獲得Rag₂基因片段。為將該片段直接連接到表達載體，所選擇的表達載體上應(yīng)具有

HindⅢ

HindⅢ

和

PstⅠ

PstⅠ

的酶切位點。
（4）為檢測Rag₂基因的表達情況，可提取治療后小鼠骨髓細胞的

蛋白質(zhì)

蛋白質(zhì)

，用

抗Rag₂蛋白的抗體

抗Rag₂蛋白的抗體

進行雜交實驗。