肺炎克雷伯氏菌是獲得性肺炎主要的致病菌??咕幬锏牟缓侠硎褂?,導致肺炎克雷伯氏菌耐藥株增多、耐藥性增強。噬菌體是一類細菌性病毒,被認為是最具前景的抗生素替代品。為研究探索應用裂解性噬菌體防治多重耐藥肺炎克雷伯氏菌引起的小鼠肺炎,研究人員進行了以下實驗。
(1)噬菌體體外抑菌實驗
材料與用具:LB培養(yǎng)基,肺炎克雷伯氏菌懸液,感染復數(shù)(MOI)分別為10、1、0.1的噬菌體phage1513,PBS(磷酸鹽平衡生理鹽水),恒溫振蕩培養(yǎng)箱,比色計。
(要求與說明:感染復數(shù)指侵染時噬菌體與細菌個數(shù)之比,感染復數(shù)越高,裂解越快。肺炎克雷伯氏菌數(shù)量每小時測一次,可通過測定波長650nm的光密度值并計算,具體方法不作要求)
完善實驗思路:
①取4個反應器皿,加入等量LB液體液體(液體/固體)培養(yǎng)基。
②分組如下:
A組:3mL肺炎克雷伯氏菌懸液+3mLPBS
B組:3mL菌液+3mL感染復數(shù)為10的噬菌體phage1513
C組:3mL菌液+3mL感染復數(shù)為1的噬菌體phage1513
D組:3mL菌液+3mL感染復數(shù)為0.1的噬菌體phage1513
③置于恒溫振蕩培養(yǎng)箱37℃、150rpm培養(yǎng),用比色計每隔1h測定650nm處光密度值用比色計每隔1h測定650nm處光密度值。
④統(tǒng)計分析數(shù)據(jù),并在坐標圖上畫出預測結果:
(2)噬菌體體內(nèi)治療實驗
采用腹腔注射的方式對小鼠進行麻醉,滴鼻20μL肺炎克雷伯氏菌懸液,建立肺炎小鼠模型。滴鼻菌液后2h,3個實驗組以滴鼻給藥方式分別給予小鼠20μL感染復數(shù)為10、1、0.1的噬菌體,對照組滴鼻給予小鼠20μL的PBS緩沖液。自滴鼻菌液開始,每12h記錄死亡小鼠數(shù)量。實驗結果如圖:
據(jù)圖可得到的結論有:①噬菌體在體內(nèi)可以有效地治療肺炎克雷伯氏菌引起的小鼠肺炎噬菌體在體內(nèi)可以有效地治療肺炎克雷伯氏菌引起的小鼠肺炎;②感染復數(shù)越高,噬菌體對小鼠肺炎感染的保護作用越強感染復數(shù)越高,噬菌體對小鼠肺炎感染的保護作用越強。
(3)分析與討論
①從變異的角度分析,肺炎克雷伯氏菌出現(xiàn)耐藥性的原因是基因突變基因突變。
②噬菌體能夠在血液及其他組織中循環(huán),但也會被抗體中和,影響其裂解效果。在急性感染治療早期,抗體中和作用并不能成為治療的障礙,原因是噬菌體活動要遠遠快于抗體的產(chǎn)生(產(chǎn)生抗體需要一段時間)噬菌體活動要遠遠快于抗體的產(chǎn)生(產(chǎn)生抗體需要一段時間)。如果噬菌體中和抗體能夠在整個噬菌體治療過程中一直出現(xiàn),可通過重復給藥噬菌體(加大噬菌體給藥劑量)重復給藥噬菌體(加大噬菌體給藥劑量)達到治療效果。
【考點】噬菌體侵染細菌實驗.
【答案】液體;用比色計每隔1h測定650nm處光密度值;噬菌體在體內(nèi)可以有效地治療肺炎克雷伯氏菌引起的小鼠肺炎;感染復數(shù)越高,噬菌體對小鼠肺炎感染的保護作用越強;基因突變;噬菌體活動要遠遠快于抗體的產(chǎn)生(產(chǎn)生抗體需要一段時間);重復給藥噬菌體(加大噬菌體給藥劑量)
【解答】
【點評】
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