pUC質(zhì)粒載體如圖所示，目的基因插入到Amp′或LacZ′中均會導(dǎo)致相應(yīng)基因失活。篩選含有重組質(zhì)粒的大腸桿菌可采用藍白斑法，機制如下：LacZ′基因在IPTG誘導(dǎo)下表達的α-肽可與大腸桿菌自身編碼的β-肽互補從而產(chǎn)生有活性的β-半乳糖苷酶，該酶能夠水解X-gal使菌落呈藍色，否則呈白色。某科研人員利用LacZ′基因與目的基因構(gòu)建基因表達載體A后再轉(zhuǎn)化大腸桿菌?；卮鹣铝袉栴}：
說明：1.Amp′表示氨芐青霉素抗性基因
LacZ′基因表示β-半乳糖苷酶基因部分DNA序列；
2.SmaI與MstI識別序列和切割位點不同
（1）1967年科學(xué)家發(fā)現(xiàn)質(zhì)粒能自我復(fù)制，并可以在細菌細胞間轉(zhuǎn)移，這一發(fā)現(xiàn)為基因轉(zhuǎn)移基因轉(zhuǎn)移找到了一種運載工具。
（2）目的基因主要是指編碼蛋白質(zhì)的基因，也可以是一些具有調(diào)控作用調(diào)控作用的因子。若需快速得到大量目的基因，可采用PCR技術(shù)，該技術(shù)一般由變性→復(fù)性（退火）→延伸變性→復(fù)性（退火）→延伸三個基本反應(yīng)步驟構(gòu)成。
（3）作為基因表達載體除了需要有復(fù)制原點、標記基因、目的基因外，還需要具有啟動子和終止子啟動子和終止子。為了避免目的基因的自身環(huán)化，寫出構(gòu)建基因表達載體A的主要實驗步驟：用MstI和BgII雙酶切pUC質(zhì)粒載體，與用MstI和BgII雙酶切獲得的目的基因混合，加入DNA連接酶進行連接反應(yīng)用MstI和BgII雙酶切pUC質(zhì)粒載體，與用MstI和BgII雙酶切獲得的目的基因混合，加入DNA連接酶進行連接反應(yīng)。
（4）轉(zhuǎn)化后的大腸桿菌需放在含有氨芐青霉素、IPTG和X-galIPTG和X-gal的培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)，篩選出白色的菌落即為含有重組質(zhì)粒（基因表達載體A）重組質(zhì)粒（基因表達載體A）的大腸桿菌。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】基因轉(zhuǎn)移；調(diào)控作用；變性→復(fù)性（退火）→延伸；啟動子和終止子；用MstI和BgII雙酶切pUC質(zhì)粒載體，與用MstI和BgII雙酶切獲得的目的基因混合，加入DNA連接酶進行連接反應(yīng)；IPTG和X-gal；重組質(zhì)粒（基因表達載體A）
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：24引用：1難度：0.6
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1．下列有關(guān)基因工程技術(shù)和蛋白質(zhì)工程技術(shù)敘述正確的是（ ）
發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
2．下列有關(guān)基因工程的敘述，正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2024/12/31 5:0:5組卷：3引用：2難度：0.7 -
3．幾丁質(zhì)是許多真菌細胞壁的重要成分，幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)，可增強其抗真菌病的能力。回答下列問題：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得。基因文庫包括和。
（2）生物體細胞內(nèi)的DNA復(fù)制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術(shù)擴增目的基因時，使反應(yīng)體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當(dāng)幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學(xué)鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉(zhuǎn)基因植株（幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6
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