為生產(chǎn)具有特定性能的α淀粉酶,研究人員從某種海洋細(xì)菌中克隆了α淀粉酶基因(1656個(gè)堿基對(duì)),利用基因工程大量制備α淀粉酶,實(shí)驗(yàn)流程見圖。請(qǐng)回答下列問題:
(1)利用PCR技術(shù)擴(kuò)增α淀粉酶基因前,需先獲得細(xì)菌的基因組DNA基因組DNA。
(2)為了便于擴(kuò)增的DNA片段與表達(dá)載體連接,需在引物的5′5′端加上限制性酶切位點(diǎn),且常在兩條引物上設(shè)計(jì)加入不同的限制性酶切位點(diǎn),主要目的是使DNA片段能定向插入表達(dá)載體,減少自連使DNA片段能定向插入表達(dá)載體,減少自連。
(3)進(jìn)行擴(kuò)增時(shí),反應(yīng)的溫度和時(shí)間需根據(jù)具體情況進(jìn)行設(shè)定,下列選項(xiàng)中②②的設(shè)定與引物有關(guān),⑥⑥的設(shè)定與擴(kuò)增片段的長(zhǎng)度有關(guān)。(填序號(hào))
①變性溫度
②退火溫度
③延伸溫度
④變性時(shí)間
⑤退火時(shí)間
⑥延伸時(shí)間
【考點(diǎn)】DNA片段的擴(kuò)增與電泳鑒定.
【答案】基因組DNA;5′;使DNA片段能定向插入表達(dá)載體,減少自連;②;⑥
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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發(fā)布:2024/7/9 8:0:8組卷:13引用:3難度:0.7
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發(fā)布:2024/12/30 23:30:2組卷:6引用:2難度:0.6 -
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發(fā)布:2024/12/30 23:30:2組卷:3引用:3難度:0.7
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