抗凝血酶Ⅲ蛋白是一種血漿糖蛋白，臨床上主要用于血液性疾病的治療。凝乳酶是奶酪生產(chǎn)中的關(guān)鍵性酶。下列是生產(chǎn)這兩種酶的相關(guān)思路，請(qǐng)回答下列問(wèn)題：

（1）圖1為通過(guò)培育轉(zhuǎn)基因奶牛獲得抗凝血酶Ⅲ蛋白的流程。
①圖中過(guò)程a指的是利用

顯微注射

顯微注射

法將抗凝血酶Ⅲ蛋白基因?qū)胧芫?。受體細(xì)胞不選用體細(xì)胞的理由是

動(dòng)物體細(xì)胞的全能型一般不能表現(xiàn)出來(lái)

動(dòng)物體細(xì)胞的全能型一般不能表現(xiàn)出來(lái)

。
②b為早期胚胎培養(yǎng)和胚胎移植，在胚胎移植前，需進(jìn)行

性別鑒定

性別鑒定

，目的是確定要培育的個(gè)體能產(chǎn)牛奶。
③可采用抗原-抗體雜交法來(lái)鑒定轉(zhuǎn)基因牛奶中是否含有抗凝血酶Ⅲ蛋白。該方法需要使用抗凝血酶Ⅲ蛋白的單克隆抗體，請(qǐng)寫(xiě)出制備該抗體的實(shí)驗(yàn)思路

向小鼠體內(nèi)注射現(xiàn)成的（標(biāo)準(zhǔn)的/純化后的）抗凝血酶Ⅲ蛋白；提取免疫小鼠的B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合，經(jīng)多次篩選獲得能產(chǎn)生特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞；對(duì)雜交瘤細(xì)胞擴(kuò)增培養(yǎng)獲取大量的單克隆抗體

向小鼠體內(nèi)注射現(xiàn)成的（標(biāo)準(zhǔn)的/純化后的）抗凝血酶Ⅲ蛋白；提取免疫小鼠的B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合，經(jīng)多次篩選獲得能產(chǎn)生特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞；對(duì)雜交瘤細(xì)胞擴(kuò)增培養(yǎng)獲取大量的單克隆抗體

。
（2）從牛胃液中分離得到的凝乳酶以其催化能力強(qiáng)而被廣泛應(yīng)用，研究人員運(yùn)用基因工程技術(shù)，將編碼該酶的基因轉(zhuǎn)移到了微生物細(xì)胞中。
①?gòu)呐Ｎ讣?xì)胞中提取mRNA，再通過(guò)

逆轉(zhuǎn)錄

逆轉(zhuǎn)錄

形成cDNA．以此cDNA為模板通過(guò)PCR擴(kuò)增目的基因，有時(shí)需要在引物的5'端設(shè)計(jì)

限制酶

限制酶

（填“限制酶”/“DNA連接酶”/“RNA聚合酶”）的識(shí)別序列，以便構(gòu)建重組DNA分子。
②為提高重組DNA分子的比例，在構(gòu)建重組DNA分子（如圖2所示）時(shí)最好選用

BamHⅠ和PstⅠ

BamHⅠ和PstⅠ

作限制酶。

③經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)，如果將該凝乳酶的第20位和24位氨基酸變?yōu)榘腚装彼?，則其催化能力將提高2倍?，F(xiàn)已知通過(guò)蛋白質(zhì)工程可生產(chǎn)高效凝乳酶，應(yīng)直接改造的是

凝乳酶基因

凝乳酶基因

（凝乳酶蛋白/凝乳酶mRNA/凝乳酶基因）。