PCR是聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的縮寫(xiě)，是一項(xiàng)在體外提供參與DNA復(fù)制的組分與反應(yīng)條件，對(duì)目的基因的核苷酸序列進(jìn)行大量復(fù)制的技術(shù)。如圖為PCR獲取并擴(kuò)增目的基因的示意圖，引物的3端有結(jié)合模板DNA的關(guān)鍵堿基，5′端堿基無(wú)嚴(yán)格限制。據(jù)圖回答下列問(wèn)題：
（1）PCR的原理是 DNA半保留復(fù)制DNA半保留復(fù)制，PCR過(guò)程中所用的酶是 耐高溫DNA聚合酶（Taq酶）耐高溫DNA聚合酶（Taq酶）。
（2）PCR的每次循環(huán)一般包括 變性、復(fù)性、延伸變性、復(fù)性、延伸三步，在PCR過(guò)程中，新合成的DNA子鏈的延伸方向是 5’→3’5’→3’，PCR獲取目的基因時(shí)；在第 33次循環(huán)后反應(yīng)體系中可出現(xiàn)目的基因。
（3）PCR獲取目的基因時(shí)，引物的作用是 界定目的基因，為DNA聚合酶提供結(jié)合位點(diǎn)并使DNA聚合酶能夠從引物的3’端連接脫氧核苷酸界定目的基因，為DNA聚合酶提供結(jié)合位點(diǎn)并使DNA聚合酶能夠從引物的3’端連接脫氧核苷酸。為了方便目的基因與質(zhì)粒的連接，可在引物的5’5’端添加限制酶識(shí)別序列。若引物上的限制酶識(shí)別序列為CCC↓GGG，在用一種酶連接目的基因與質(zhì)粒時(shí)，所用的酶為 T4DNA連接酶T4DNA連接酶。
（4）科學(xué)設(shè)計(jì)引物是PCR能否成功的關(guān)鍵。若引物的堿基過(guò)多或引物的G、C含量過(guò)高，會(huì)造成PCR的效率偏低，收獲的目的基因較少，原因是 引物與模板鏈結(jié)合過(guò)于緊密，變性時(shí)引物不易與模板鏈脫離（影響變性）引物與模板鏈結(jié)合過(guò)于緊密，變性時(shí)引物不易與模板鏈脫離（影響變性）。若對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)有兩個(gè)或多個(gè)條帶，從引物角度分析，原因可能是 引物過(guò)短導(dǎo)致引物的特異性下降引物過(guò)短導(dǎo)致引物的特異性下降。
【考點(diǎn)】DNA片段的擴(kuò)增與電泳鑒定．
【答案】DNA半保留復(fù)制；耐高溫DNA聚合酶（Taq酶）；變性、復(fù)性、延伸；5’→3’；3；界定目的基因，為DNA聚合酶提供結(jié)合位點(diǎn)并使DNA聚合酶能夠從引物的3’端連接脫氧核苷酸；5’；T4DNA連接酶；引物與模板鏈結(jié)合過(guò)于緊密，變性時(shí)引物不易與模板鏈脫離（影響變性）；引物過(guò)短導(dǎo)致引物的特異性下降
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
聲明：本試題解析著作權(quán)屬菁優(yōu)網(wǎng)所有，未經(jīng)書(shū)面同意，不得復(fù)制發(fā)布。
發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：6引用：1難度：0.6
相似題
-
1．數(shù)字PCR技術(shù)是一種核酸分子絕對(duì)定量技術(shù)，其原理如圖所示。下列有關(guān)敘述正確的是（ ）
發(fā)布：2024/12/30 23:30:2組卷：7引用：2難度：0.6 -
2．科學(xué)家為了提高光合作用過(guò)程中Rubiaco酶對(duì)CO2的親和力，利用PCR定點(diǎn)突變技術(shù)改造Rubisco酶基因，從而顯著提高了植物的光合作用速率。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：
（1）PCR定點(diǎn)突變技術(shù)屬于（填“基因工程”或“蛋白質(zhì)工程”）?？衫枚c(diǎn)突變的DNA構(gòu)建基因表達(dá)載體，常用將基因表達(dá)載體導(dǎo)入植物細(xì)胞，還需用到植物細(xì)胞工程中的技術(shù)，才能最終獲得轉(zhuǎn)基因植物。
（2）PCR過(guò)程所依據(jù)的原理是。利用PCR技術(shù)擴(kuò)增，若將一個(gè)目的基因復(fù)制10次，則需要在緩沖液中至少加入個(gè)引物。
（3）目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞內(nèi)，并在受體細(xì)胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達(dá)的過(guò)程稱為?？蒲腥藛T通過(guò)實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)培育的該轉(zhuǎn)基因植株的光合作用速率并未明顯增大，可能的原因是。
（4）另有一些科學(xué)家利用生物技術(shù)將人的生長(zhǎng)激素基因?qū)胄∈笫芫训募?xì)胞核中，經(jīng)培育獲得一種轉(zhuǎn)基因小鼠，其膀胱上皮細(xì)胞可以合成人的生長(zhǎng)激素并分泌到尿液中。有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是。
A．選擇受精卵作為外源基因的受體細(xì)胞是因?yàn)檫@種細(xì)胞的全能性最容易表達(dá)
B．采用DNA分子雜交技術(shù)可檢測(cè)外源基因在小鼠細(xì)胞內(nèi)是否成功表達(dá)
C．人的生長(zhǎng)激素基因能在小鼠細(xì)胞表達(dá)，說(shuō)明遺傳密碼在不同種生物中可以通用
D．將轉(zhuǎn)基因小鼠體細(xì)胞進(jìn)行核移植（克隆），可以獲得多個(gè)具有外源基因的后代發(fā)布：2025/1/16 8:0:1組卷：14引用：2難度：0.6 -
3．下列關(guān)于DNA片段擴(kuò)增及其鑒定的說(shuō)法錯(cuò)誤的是（ ）
發(fā)布：2024/12/30 23:30:2組卷：3引用：3難度：0.7
相關(guān)試卷