長期高血糖可引發(fā)血管細胞衰老?？蒲腥藛T為研究S蛋白在因高血糖引發(fā)的血管細胞衰老中的作用，以腺病毒為載體將編碼S蛋白的S基因導入血管細胞，實現S蛋白在血管細胞中的大量表達。
（1）腺病毒的遺傳物質為DNA，其復制需要E₁、E₂、E₃基因共同完成。為將S基因導入腺病毒，科研人員首先構建了含S基因的重組質粒，過程如圖1所示。

①科研人員將S基因用

BamH I 和EcoR I

BamH I 和EcoR I

酶切后，用DNA連接酶連入質粒Ⅰ，得到重組質粒Ⅰ（圖1甲所示），導入用

CaCl₂

CaCl₂

處理制備的感受態(tài)細菌。用添加抗生素的培養(yǎng)基篩選，對所長出的單菌落提取質粒，通過

設計S基因特異的引物進行PCR（或“用S基因特異序列作為探針進行核酸分子雜交”）

設計S基因特異的引物進行PCR（或“用S基因特異序列作為探針進行核酸分子雜交”）

的方法可鑒定重組質粒Ⅰ是否插入了S基因。
②用PmeⅠ酶切重組質粒Ⅰ獲得DNA片段。將此DNA片段與質粒Ⅱ（圖1乙所示）共同轉化BJ細菌。在BJ細菌體內某些酶的作用下，含同源序列的DNA片段（圖1甲、乙所示的左臂、右臂）可以發(fā)生

交換（或“同源重組”）

交換（或“同源重組”）

，產生重組質粒Ⅱ（圖1丙所示）。使用添加

卡那霉素

卡那霉素

的培養(yǎng)基可篩選得到成功導入重組質粒Ⅱ的菌落。
③將含S基因的重組質粒Ⅱ，用

PacI

PacI

酶切后，獲得改造后的腺病毒DNA。將其導入A細胞（A細胞含有E₃基因，可表達E₃蛋白），如圖2所示。腺病毒DNA在A細胞內能夠

復制并指導腺病毒外殼蛋白的合成

復制并指導腺病毒外殼蛋白的合成

，從而產生大量重組腺病毒，腺病毒進入宿主細胞后不整合到宿主細胞染色體上。

④綜合上述信息，從生物安全性角度分析重組腺病毒載體的優(yōu)點：

重組腺病毒只能在A細胞中才能夠復制，即使侵染其他細胞，也不能復制；重組腺病毒進入宿主細胞后不整合到宿主細胞染色體上；腺病毒是人工改造的載體，不含致病基因

重組腺病毒只能在A細胞中才能夠復制，即使侵染其他細胞，也不能復制；重組腺病毒進入宿主細胞后不整合到宿主細胞染色體上；腺病毒是人工改造的載體，不含致病基因

（寫出2點）。
（2）用含S基因的重組腺病毒分別感染正常人及糖尿病患者的血管細胞，使S蛋白在血管細胞中大量表達。
①提取正常人、糖尿病患者及兩者轉入S基因后的血管細胞的蛋白，用

抗原-抗體特異性雜交

抗原-抗體特異性雜交

方法檢測Ⅰ蛋白（一種能促進細胞衰老的蛋白）的表達量，結果如圖3所示。

②實驗結果顯示

糖尿病患者（或“2組”）

糖尿病患者（或“2組”）

血管細胞中Ⅰ蛋白表達量最高，推測S蛋白對高血糖引發(fā)的血管細胞衰老的作用及機制是

S蛋白通過降低I蛋白的表達，抑制高血糖引發(fā)的血管細胞衰老

S蛋白通過降低I蛋白的表達，抑制高血糖引發(fā)的血管細胞衰老

。