設計引物是PCR技術中至關重要的一環(huán)。設計的引物能與模板鏈目的位點互補結合，但不能在非目的位點與DNA結合，要防止引物之間或自身互補配對形成二聚體或折疊后互補配對形成發(fā)夾結構?；卮鹣铝杏嘘P引物及引物設計的問題：
（1）PCR中，引物的作用是 使DNA聚合酶能夠從引物的3'端開始連接脫氧核苷酸使DNA聚合酶能夠從引物的3'端開始連接脫氧核苷酸。
（2）圖1所示的引物中，其中一種設計不合理，原因是 引物Ⅰ折疊后會發(fā)生堿基互補配對形成發(fā)夾結構引物Ⅰ折疊后會發(fā)生堿基互補配對形成發(fā)夾結構。
（3）DNA分子雜交時需要單鏈DNA探針，常用不對稱PCR來制備。不對稱PCR中使用的一對引物的量不相等，其中少的稱為限制性引物，多的稱為非限制性引物，開始擴增出的是雙鏈DNA，后來擴增出的是單鏈DNA．圖2中，α鏈為所需的DNA分子探針，應選用引物 ⅣⅣ作非限制性引物；已知圖示DNA有n個，前10次循環(huán)的產(chǎn)物為雙鏈DNA，后10次循環(huán)的產(chǎn)物是單鏈DNA，則最終可獲得 n×210n×210個所需的單鏈探針；常用 脂糖凝膠電泳脂糖凝膠電泳法來鑒定PCR的產(chǎn)物。
（4）圖3表示利用基因工程生產(chǎn)某藥用蛋白過程中使用的質粒及目的基因的部分結構，β-半乳糖苷酶能分解無色的X-gal產(chǎn)生藍色物質。圖中顯示，氨芐青霉素抗性基因、β-半乳糖苷酶基因、目的基因的序列中分別含有1種、5種、2種限制酶的識別序列及切割位點。
在設計PCR引物時添加限制酶 XhoⅠ和MunⅠXhoⅠ和MunⅠ的識別序列，使擴增得到的目的基因首端、末端能分別被這兩種酶識別并剪切，得到與質粒相同的黏性末端，以確保目的基因與質粒載體正確連接。寫出篩選出成功導入目的基因的工程菌的思路：大腸桿菌與重組質?；旌吓囵B(yǎng)，一段時間后，將其接種到添加了氨芐青霉素和X-gal的培養(yǎng)基上篩選出白色的菌落即為工程菌大腸桿菌與重組質?；旌吓囵B(yǎng)，一段時間后，將其接種到添加了氨芐青霉素和X-gal的培養(yǎng)基上篩選出白色的菌落即為工程菌。
【考點】基因工程的操作過程綜合；DNA片段的擴增與電泳鑒定．
【答案】使DNA聚合酶能夠從引物的3'端開始連接脫氧核苷酸；引物Ⅰ折疊后會發(fā)生堿基互補配對形成發(fā)夾結構；Ⅳ；n×210；脂糖凝膠電泳；XhoⅠ和MunⅠ；大腸桿菌與重組質?；旌吓囵B(yǎng)，一段時間后，將其接種到添加了氨芐青霉素和X-gal的培養(yǎng)基上篩選出白色的菌落即為工程菌
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/4/20 14:35:0組卷：23引用：2難度：0.7
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（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得?；蛭膸彀?和。
（2）生物體細胞內的DNA復制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術擴增目的基因時，使反應體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質酶基因和質粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉基因植株（幾丁質酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6 -
3．下列有關基因工程的敘述，正確的是（ ?。?/h2>
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