為探究煙臺(tái)黑豬SLA-2抗原的呈遞規(guī)律研究者構(gòu)建了SLA-2基因的表達(dá)載體并將其在改造后的豬腎上皮細(xì)胞（sT2細(xì)胞）中表達(dá)。PCR擴(kuò)增目的基因的反應(yīng)體系為：煙臺(tái)黑豬的基因組、引物A和B、DNA聚合酶、緩沖液和dNTP等；操作流程為：①95℃預(yù)處理3 min→②95℃保溫30 s→③66℃保溫30 s→④72℃保溫1 min→⑤操作②-③-④循環(huán)35次→⑥保溫10 min。構(gòu)建基因表達(dá)載體所用的質(zhì)粒中，含有的限制酶識(shí)別序列如下表所示。
| 限制酶 | EcoRⅠ | NotⅠ | NheⅠ | XbaⅠ | BamHⅠ |
| 識(shí)別序列 | 5'-GAATTC-3' | 5'-GCGGCCGC-3' | 5'-GCTAGC-3' | 5'-TCTAGA-3' | 5'-GGATCC-3' |
能夠使限制酶切割目的基因，以便于和質(zhì)粒連接
能夠使限制酶切割目的基因，以便于和質(zhì)粒連接
，加入的位置是引物的 5'端
5'端
（填“3'端”或“5'端”）PCR操作流程中步驟②的目的是 使DNA分子高溫變性解旋
使DNA分子高溫變性解旋
，步驟③的目的是 使引物與目的基因通過(guò)堿基互補(bǔ)配對(duì)結(jié)合
使引物與目的基因通過(guò)堿基互補(bǔ)配對(duì)結(jié)合
。（2）構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，應(yīng)選用的限制酶是
XbaXbaXbaⅠ和NotⅠ
XbaXbaXbaⅠ和NotⅠ
。（3）將基因表達(dá)載體轉(zhuǎn)染人胚胎上皮細(xì)胞，獲得攜帶SLA-2基因和嘌呤霉素抗性基因的病毒表達(dá)載體，用后者感染sT2細(xì)胞后，再利用含嘌呤霉素培養(yǎng)液篩選出成功導(dǎo)入SLA-2基因的細(xì)胞（嘌呤霉素是一種能抑制細(xì)胞中蛋白質(zhì)合成的抗生素）。請(qǐng)?jiān)O(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)確定用于篩選的嘌呤霉素溶液最低濃度。（求：寫(xiě)出簡(jiǎn)要思路并預(yù)測(cè)結(jié)果）
將未導(dǎo)入外源基因的sT2細(xì)胞在一系列濃度梯度嘌呤霉素的培養(yǎng)液中培養(yǎng)，一段時(shí)間后，檢測(cè)不同濃度溶液中sT2細(xì)胞的存活情況?？梢詺⑺浪屑?xì)胞的最低濃度即為所需
將未導(dǎo)入外源基因的sT2細(xì)胞在一系列濃度梯度嘌呤霉素的培養(yǎng)液中培養(yǎng)，一段時(shí)間后，檢測(cè)不同濃度溶液中sT2細(xì)胞的存活情況?？梢詺⑺浪屑?xì)胞的最低濃度即為所需
【考點(diǎn)】基因工程的操作過(guò)程綜合．
【答案】能夠使限制酶切割目的基因，以便于和質(zhì)粒連接；5'端；使DNA分子高溫變性解旋；使引物與目的基因通過(guò)堿基互補(bǔ)配對(duì)結(jié)合；XbaXbaXbaⅠ和NotⅠ；將未導(dǎo)入外源基因的sT2細(xì)胞在一系列濃度梯度嘌呤霉素的培養(yǎng)液中培養(yǎng)，一段時(shí)間后，檢測(cè)不同濃度溶液中sT2細(xì)胞的存活情況?？梢詺⑺浪屑?xì)胞的最低濃度即為所需
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：10引用：1難度：0.7
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1．下列有關(guān)基因工程技術(shù)和蛋白質(zhì)工程技術(shù)敘述正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
2．幾丁質(zhì)是許多真菌細(xì)胞壁的重要成分，幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過(guò)基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)，可增強(qiáng)其抗真菌病的能力?；卮鹣铝袉?wèn)題：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫(kù)中獲得?；蛭膸?kù)包括和。
（2）生物體細(xì)胞內(nèi)的DNA復(fù)制開(kāi)始時(shí)，解開(kāi)DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因時(shí)，使反應(yīng)體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個(gè)解鏈過(guò)程的共同點(diǎn)是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個(gè)DNA片段連接起來(lái)的酶，常見(jiàn)的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當(dāng)幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時(shí)，DNA連接酶催化形成的化學(xué)鍵是。
（4）提取RNA時(shí)，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉(zhuǎn)基因植株（幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒(méi)有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6 -
3．下列有關(guān)基因工程的敘述，正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2024/12/31 5:0:5組卷：3引用：2難度：0.7
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