豬源大腸桿菌會(huì)引起仔豬發(fā)生腸炎、腸毒血癥等疾病。LTB和ST1是豬源大腸桿菌腸毒素基因，融合基因LTB-ST1的表達(dá)產(chǎn)物L(fēng)TB-ST1融合蛋白可有效預(yù)防仔豬黃痢。構(gòu)建融合基因的方法如圖1所示。請(qǐng)回答：
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（1）豬源大腸桿菌與豬細(xì)胞在結(jié)構(gòu)上最主要的區(qū)別是

無以核膜為界限的細(xì)胞核

無以核膜為界限的細(xì)胞核

，豬源大腸桿菌與豬的種間關(guān)系為

寄生

寄生

。
（2）在對(duì)LTB基因與ST1基因進(jìn)行PCR過程中，DNA解旋的方法是

高溫

高溫

，若引物中C或G的堿基數(shù)量越高，則復(fù)性的溫度會(huì)

升高

升高

（選填“升高”、“降低”或“不變”）。
（3）圖1中限制酶1使得LTB基因中的

磷酸二酯

磷酸二酯

鍵斷裂。為保證經(jīng)酶處理后的LTB基因與ST1基因能夠正常連接，限制酶1與限制酶2在選取時(shí)需滿足

以形成相同的黏性末端

以形成相同的黏性末端

的特點(diǎn)，可見這種融合基因的方法具有局限性。
（4）為突破限制酶選取的局限性，研究人員通過重組PCR技術(shù)構(gòu)建了LTB-ST1融合基因，如圖2所示，請(qǐng)回答：
①重組PCR技術(shù)依據(jù)的生物學(xué)原理是

DNA（半保留）復(fù)制

DNA（半保留）復(fù)制

。PCR1和PCR2需要在兩個(gè)不同反應(yīng)體系中進(jìn)行的原因是

引物P2與P3可發(fā)生部分堿基互補(bǔ)配對(duì)，在同一個(gè)體系中無法正常完成復(fù)性過
程

引物P2與P3可發(fā)生部分堿基互補(bǔ)配對(duì)，在同一個(gè)體系中無法正常完成復(fù)性過
程

，兩個(gè)反應(yīng)體系中加入的物質(zhì)中不同的是

引物、模板

引物、模板

。下列序列中符合引物P₂與引物P₃的5′末端堿基序列要求的是：

AD

AD

。
A.5'ATCGGACTTG?3'
B.5'ATCGGAGAAC?3'
C.5′TAGCCTGAAC?3'
D.5′CAAGTCCGAT?3'
②重組PCR技術(shù)不僅可用于構(gòu)建融合基因，還可用于研究基因定點(diǎn)突變。若要在兩個(gè)基因連接處實(shí)現(xiàn)基因定點(diǎn)突變，可對(duì)

引物P2與P3

引物P2與P3

進(jìn)行設(shè)計(jì)，后通過重組PCR，使新合成的DNA中含有突變位點(diǎn)，從而實(shí)現(xiàn)基因的定點(diǎn)突變。