Sanger法DNA測(cè)序的核心原理：由于雙脫氧核苷酸（ddNTP）五碳糖的2'和3'碳原子都不含羥基，在DNA合成過(guò)程中不能形成“相應(yīng)化學(xué)鍵”，因此可中斷DNA分子合成反應(yīng)。在四個(gè)含有4種脫氧核苷酸（dNTP）的PCR反應(yīng)體系中分別加入一定比例帶有放射性同位素標(biāo)記的ddNTP（分別為ddATP、ddCTP、ddGTP和ddTTP），在PCR過(guò)程中復(fù)制隨機(jī)終止，產(chǎn)生四組不同長(zhǎng)度的一系列終止處帶有標(biāo)記的DNA片段，如圖1．然后在變性凝膠上進(jìn)行電泳和放射自顯影后，可以根據(jù)電泳帶的位置確定待測(cè)分子的DNA序列，具體過(guò)程見(jiàn)圖2．（注：ddA是ddATP的縮寫(xiě)形式）
（1）題干中“相應(yīng)化學(xué)鍵”是磷酸二酯鍵磷酸二酯鍵，圖1過(guò)程Ⅰ橫線①處加入的物質(zhì)的特點(diǎn)是耐高溫耐高溫，該過(guò)程需要添加引物的原因是DNA聚合酶只能將游離的脫氧核苷酸添加到已有核酸片段上DNA聚合酶只能將游離的脫氧核苷酸添加到已有核酸片段上。
（2）題干中“在變性凝膠上進(jìn)行電泳……”中“變性”是指破壞DNA分子中氫鍵，獲得單鏈破壞DNA分子中氫鍵，獲得單鏈，其目的是避免模板鏈對(duì)結(jié)果的影響（或使模板鏈與子鏈分離，使電泳結(jié)果直接反映子鏈的長(zhǎng)度，便于讀序）避免模板鏈對(duì)結(jié)果的影響（或使模板鏈與子鏈分離，使電泳結(jié)果直接反映子鏈的長(zhǎng)度，便于讀序）。
（3）某同學(xué)要通過(guò)PCR技術(shù)獲得被32P標(biāo)記且以堿基“C”為末端、不同長(zhǎng)度的子鏈DNA片段，在反應(yīng)管中已有模板、引物、酶和相應(yīng)緩沖液等，還需加入的原料有dATP、dGTP、dTTP、dCTP、ddCTPdATP、dGTP、dTTP、dCTP、ddCTP。
（4）若模板鏈?zhǔn)恰?'…TCAGCTCGAATC…5'”，變性后電泳結(jié)果如圖2所示，則模板DNA電泳后所處的位置最可能為b處b處（選填“a處”或“b處”），原因是模板DNA長(zhǎng)度最長(zhǎng)（分子量最大）模板DNA長(zhǎng)度最長(zhǎng)（分子量最大）。
【考點(diǎn)】DNA片段的擴(kuò)增與電泳鑒定；目的基因的篩選與獲取．
【答案】磷酸二酯鍵；耐高溫；DNA聚合酶只能將游離的脫氧核苷酸添加到已有核酸片段上；破壞DNA分子中氫鍵，獲得單鏈；避免模板鏈對(duì)結(jié)果的影響（或使模板鏈與子鏈分離，使電泳結(jié)果直接反映子鏈的長(zhǎng)度，便于讀序）；dATP、dGTP、dTTP、dCTP、ddCTP；b處；模板DNA長(zhǎng)度最長(zhǎng)（分子量最大）
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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發(fā)布：2024/4/20 14:35:0組卷：23引用：1難度：0.7
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1．數(shù)字PCR技術(shù)是一種核酸分子絕對(duì)定量技術(shù)，其原理如圖所示。下列有關(guān)敘述正確的是（ ?。?img alt src="http://img.jyeoo.net/quiz/images/202204/49/6d911ea3.png" style="vertical-align:middle" />
發(fā)布：2024/12/30 23:30:2組卷：6引用：2難度：0.6 -
2．科學(xué)家為了提高光合作用過(guò)程中Rubiaco酶對(duì)CO2的親和力，利用PCR定點(diǎn)突變技術(shù)改造Rubisco酶基因，從而顯著提高了植物的光合作用速率。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：
（1）PCR定點(diǎn)突變技術(shù)屬于（填“基因工程”或“蛋白質(zhì)工程”）。可利用定點(diǎn)突變的DNA構(gòu)建基因表達(dá)載體，常用將基因表達(dá)載體導(dǎo)入植物細(xì)胞，還需用到植物細(xì)胞工程中的技術(shù)，才能最終獲得轉(zhuǎn)基因植物。
（2）PCR過(guò)程所依據(jù)的原理是。利用PCR技術(shù)擴(kuò)增，若將一個(gè)目的基因復(fù)制10次，則需要在緩沖液中至少加入個(gè)引物。
（3）目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞內(nèi)，并在受體細(xì)胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達(dá)的過(guò)程稱(chēng)為。科研人員通過(guò)實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)培育的該轉(zhuǎn)基因植株的光合作用速率并未明顯增大，可能的原因是。
（4）另有一些科學(xué)家利用生物技術(shù)將人的生長(zhǎng)激素基因?qū)胄∈笫芫训募?xì)胞核中，經(jīng)培育獲得一種轉(zhuǎn)基因小鼠，其膀胱上皮細(xì)胞可以合成人的生長(zhǎng)激素并分泌到尿液中。有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是。
A．選擇受精卵作為外源基因的受體細(xì)胞是因?yàn)檫@種細(xì)胞的全能性最容易表達(dá)
B．采用DNA分子雜交技術(shù)可檢測(cè)外源基因在小鼠細(xì)胞內(nèi)是否成功表達(dá)
C．人的生長(zhǎng)激素基因能在小鼠細(xì)胞表達(dá)，說(shuō)明遺傳密碼在不同種生物中可以通用
D．將轉(zhuǎn)基因小鼠體細(xì)胞進(jìn)行核移植（克?。?，可以獲得多個(gè)具有外源基因的后代發(fā)布：2025/1/16 8:0:1組卷：14引用：2難度：0.6 -
3．下列關(guān)于DNA片段擴(kuò)增及其鑒定的說(shuō)法錯(cuò)誤的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2024/12/30 23:30:2組卷：3引用：3難度：0.7
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