人體內的t-PA蛋白能高效降解由纖維蛋白凝聚而成的血栓,是心梗和腦血栓的急救藥。然而,為心梗患者注射大劑量的基因工程t-PA會誘發(fā)顱內出血,其原因在于t-PA與纖維蛋白結合的特異性不高。研究證實,將t-PA第84位的半胱氨酸換成絲氨酸,能顯著降低出血副作用。據此,先對天然的t-PA基因進行序列改造,然后再采取傳統(tǒng)的基因工程方法表達該改造后的基因,可制造出性能優(yōu)異的改良t-PA蛋白。(注:如圖表示相關的目的基因、載體及限制酶。pCLY11為質粒,新霉素為抗生素。)
請回答下列問題:
(1)以上制造出性能優(yōu)異的改良t-PA蛋白的過程被稱為 蛋白質蛋白質工程。
(2)已知人t-PA基因序列已測出,且第84位半胱氨酸的模板鏈堿基序列為ACA,而絲氨酸的模板鏈堿基序列為AGA,因此要獲得改造后的目的基因最好采用 化學方法人工合成化學方法人工合成方法獲得。
(3)若t-PA改良基因的粘性末端如圖所示,那么需選用限制酶XmaⅠ和 BgLIIBgLII切開質粒pCLY11,才能與t-PA改良基因高效連接。在基因工程中,最核心的一步為 基因表達載體的構建基因表達載體的構建。
(4)一般選擇在未加入新霉素的培養(yǎng)基中生存的大腸桿菌作為受體細胞,目的是 以便篩選出導入質粒pCLY1I的大腸桿菌以便篩選出導入質粒pCLY1I的大腸桿菌。在加入新霉素的培養(yǎng)基中形成菌落的受體細胞并非都是目的菌株,原因是 未連目的基因的質粒也可以在這種培養(yǎng)基上生長未連目的基因的質粒也可以在這種培養(yǎng)基上生長,這時需選擇呈 白白色的菌落,進一步培養(yǎng)、檢測和鑒定,以選育出能生產改良t-PA蛋白的工程菌株。
【考點】基因工程的操作過程綜合.
【答案】蛋白質;化學方法人工合成;BgLII;基因表達載體的構建;以便篩選出導入質粒pCLY1I的大腸桿菌;未連目的基因的質粒也可以在這種培養(yǎng)基上生長;白
【解答】
【點評】
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發(fā)布:2024/4/20 14:35:0組卷:16難度:0.7
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