家畜胚胎的性別鑒定技術(shù)對畜牧業(yè)的發(fā)展具有重要意義。巢式PCR擴(kuò)增反應(yīng)在兩次PCR反應(yīng)中使用兩組不同引物，先使用外引物對目標(biāo)區(qū)域DNA片段進(jìn)行第一次PCR擴(kuò)增，產(chǎn)生中間產(chǎn)物，然后使用內(nèi)引物對中間產(chǎn)物進(jìn)行第二次PCR擴(kuò)增，產(chǎn)生目標(biāo)產(chǎn)物。如圖1是式PCR工作原理示意圖，請回答：

（1）巢式PCR反應(yīng)體系中需要加入模板、

DNA聚合酶

DNA聚合酶

、

dNTP（原料）

dNTP（原料）

、引物、Mg²⁺、緩沖液等。
（2）相比于常規(guī)PCR獲得的產(chǎn)物而言，巢式PCR獲得的產(chǎn)物特異性

更強(qiáng)

更強(qiáng)

，原因是如果利用外引物擴(kuò)增產(chǎn)生了錯誤片段，再利用內(nèi)引物擴(kuò)增在錯誤片段上進(jìn)行引物配對并擴(kuò)增的概率

升高

升高

。
（3）巢式PCR通常在一個試管中進(jìn)行第一階段反應(yīng)，然后將中間產(chǎn)物等轉(zhuǎn)移到第二試管中進(jìn)行第二階段反應(yīng)，不在同一試管完成的主要原因是

防止引物配對特異性不強(qiáng)造成的非特異性擴(kuò)增的污染

防止引物配對特異性不強(qiáng)造成的非特異性擴(kuò)增的污染

。
（4）科研人員利用多重巢式PCR技術(shù)同時擴(kuò)增Y染色體上雄性決定基因（SRY）和常染色體上的酪蛋白基因（CSN1S1），進(jìn)行早期胚胎的性別鑒定，并將鑒定后的胚胎進(jìn)行移植。表是主要實驗步驟，請完成表：

實驗?zāi)康?/td>	方法步驟要點
胚胎樣品DNA提取	選取囊胚的① 滋養(yǎng)層 滋養(yǎng)層 細(xì)胞提取DNA
PCR引物的設(shè)計和合成	根據(jù)牛的SRY和CSN1S1基因序列設(shè)計合成② 2 2 對引物
PCR過程	預(yù)變性→③ 變性 變性 →退火→延伸
觀察擴(kuò)增結(jié)果	電泳分析
受體牛④ 同期發(fā)情 同期發(fā)情 處理	對受體牛注射前列腺素
胚胎移植	將篩選出的胚胎移植到受體牛的子宮內(nèi)

（5）電泳結(jié)果如圖2所示，1～5號為取自不同胚胎的DNA樣品進(jìn)行巢式PCR的產(chǎn)物。A和B條帶中代表CSN1S1的是

A

A

?？梢源_定1～5號中

1，2，4

1，2，4

號胚胎為雌性。
（6）牛胚胎性別的鑒定除了可以利用PCR外，下列方法也可行的有

②③④

②③④

。
①差速離心法
②核酸探針雜交法
③染色體核型分析法
④H-Y抗血清免疫學(xué)法（H-Y抗原編碼基因位于Y染色體上）