鹽脅迫會影響植物的生長,可用轉基因技術提高植物的耐鹽能力。mybx是響應鹽脅迫的關鍵轉錄因子,其功能缺失突變體對150mmol?L-1的NaCl高度敏感。HKT1基因表達的Na+轉運蛋白介導Na+從木質部導管到木質部薄壁細胞的運輸,減少木質部的Na+含量,從而提高植物的耐鹽能力。科研人員構建HKT1基因的表達載體獲得HKT1基因表達菌體,構建過程如圖所示。四種限制酶的識別序列及切割位點如表所示?;卮鹣铝袉栴}:
限制酶 | HindⅢ | BamHⅠ | XhoⅠ | BglⅡ |
識別序列及切割位點 | A↓AGCTT | G↓GATCC | C↓TCGAG | A↓GATCT |
RNA酶抑制劑
RNA酶抑制劑
,以防止RNA降解。過程③要選擇合適的限制酶切割含HKT1基因的DNA片段,應選用的表中的限制酶是 HindⅢ、XhoI
HindⅢ、XhoI
。(2)過程⑤將重組質粒導入大腸桿菌。在篩選含有HKT1基因的大腸桿菌時,除必要的營養(yǎng)物質,還需要在培養(yǎng)基中添加
卡那霉素
卡那霉素
。提取重組質粒A將其導入農桿菌,用農桿菌侵染擬南芥mybz突變體花序,農桿菌的作用是 攜帶HKT1基因進入擬南芥細胞,并使HKT1基因在細胞內維持穩(wěn)定和表達
攜帶HKT1基因進入擬南芥細胞,并使HKT1基因在細胞內維持穩(wěn)定和表達
。(3)檢測轉HKT1基因擬南芥mybr突變株是否表達出Na+轉運蛋白時,可用
抗原―抗體雜交
抗原―抗體雜交
技術進行檢測。若Na+轉運蛋白高度表達,還需要進一步鑒定其抗性程度,實驗的思路是 將轉基因突變株種植在施加了濃度為150mmol?L-1的NaCl溶液的土壤中,檢測木質部薄壁細胞的含鹽量和植株的生長狀況
將轉基因突變株種植在施加了濃度為150mmol?L-1的NaCl溶液的土壤中,檢測木質部薄壁細胞的含鹽量和植株的生長狀況
。【考點】基因工程的操作過程綜合.
【答案】RNA酶抑制劑;HindⅢ、XhoI;卡那霉素;攜帶HKT1基因進入擬南芥細胞,并使HKT1基因在細胞內維持穩(wěn)定和表達;抗原―抗體雜交;將轉基因突變株種植在施加了濃度為150mmol?L-1的NaCl溶液的土壤中,檢測木質部薄壁細胞的含鹽量和植株的生長狀況
【解答】
【點評】
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