大麗輪枝菌（一種絲狀真菌）是引起棉花黃萎病的主要病原菌。為觀察大麗輪枝菌對棉花根侵染路徑，研究人員利用綠色熒光蛋白基因（sGFP）轉(zhuǎn)染大麗輪枝菌，培育出表達綠色熒光蛋白的轉(zhuǎn)基因菌株，主要過程如圖（圖中a鏈和b鏈分別是相應(yīng)基因轉(zhuǎn)錄模板鏈）。分析回答：
（1）研究者將獲得的sGFP基因利用PCR技術(shù)擴增，該過程需設(shè)計合適的引物。設(shè)計引物時需已知sGFP基因兩端的核苷酸序列sGFP基因兩端的核苷酸序列，為便于進行后續(xù)操作還需在引物中添加限制酶的識別序列，圖中b鏈的黏性末端堿基序列（5'→3'）為AGCTAGCT。PCR擴增時需要設(shè)計2種引物，其原因是基因由兩條反向平行的鏈構(gòu)成，且都作模板，其上堿基序列不同基因由兩條反向平行的鏈構(gòu)成，且都作模板，其上堿基序列不同。PCR技術(shù)操作步驟中包括兩次升溫和一次降溫，其中降溫的目的是使引物和模板鏈結(jié)合使引物和模板鏈結(jié)合。
（2）利用圖示目的基因和質(zhì)粒構(gòu)建重組質(zhì)粒，選用限制酶HindⅢ和BamHⅠ切割，優(yōu)點是產(chǎn)生不同的黏性末端，防止目的基因和載體反向連接，自身環(huán)化產(chǎn)生不同的黏性末端，防止目的基因和載體反向連接，自身環(huán)化。
（3過程③要初步篩選出導(dǎo)入重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌，要在含有潮霉素潮霉素的培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)。
（4）用sGFP基因作為探針可檢測轉(zhuǎn)基因大麗輪枝菌中是否含有sGFP基因，sGFP基因的mRNAsGFP基因，sGFP基因的mRNA，最終通過檢測大麗輪枝菌菌絲細胞中綠色熒光強度大麗輪枝菌菌絲細胞中綠色熒光強度篩選出綠色熒光蛋白旺盛表達的大麗輪枝菌。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】sGFP基因兩端的核苷酸序列；AGCT；基因由兩條反向平行的鏈構(gòu)成，且都作模板，其上堿基序列不同；使引物和模板鏈結(jié)合；產(chǎn)生不同的黏性末端，防止目的基因和載體反向連接，自身環(huán)化；潮霉素；sGFP基因，sGFP基因的mRNA；大麗輪枝菌菌絲細胞中綠色熒光強度
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/4/20 14:35:0組卷：24引用：2難度：0.5
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1．下列有關(guān)基因工程技術(shù)和蛋白質(zhì)工程技術(shù)敘述正確的是（ ?。?/h2>
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3．幾丁質(zhì)是許多真菌細胞壁的重要成分，幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)，可增強其抗真菌病的能力。回答下列問題：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得?；蛭膸彀?和。
（2）生物體細胞內(nèi)的DNA復(fù)制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術(shù)擴增目的基因時，使反應(yīng)體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學(xué)鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉(zhuǎn)基因植株（幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6
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