苯丙酮尿癥是單基因遺傳病，科學家將正?；駾導入該病患者的細胞，以治療該病。圖甲為A、B、C三種質粒，圖乙為含有目的基因D的DNA片段，圖丙為重組載體的示意圖。Ap為氨芐青霉素抗性基因，Tc為四環(huán)素抗性基因，lacZ為藍色顯色基因，其表達產物可以將無色化合物X-gal轉化成藍色物質，使菌落呈藍色、而非白色，EcoRI（0.6Kb）、PvuI（0.8Kb）為限制酶及其切割位點與復制原點之間的距離。回答下列問題：
（1）基因工程操作的核心步驟是 基因表達載體的構建基因表達載體的構建。圖甲中三種質粒適宜作為運載體的是質粒 BB，與另外兩種質粒相比，其作為載體的優(yōu)點是 有標記基因，復制原點不會被限制酶切割有標記基因，復制原點不會被限制酶切割。
（2）獲取目的基因D時應選擇乙圖中的 PvuⅠPvuⅠ對其所在的DNA進行切割。如果僅知道D基因首尾的部分核苷酸序列，根據(jù)D基因已知核苷酸序列合成 引物引物，利用PCR擴增目的基因。
（3）將目的基因D和甲圖中相應質粒連接后，得到圖丙中三種方式。為選出正向連接的重組質粒，使用 EcoRⅠEcoRⅠ對質粒單酶切后，進行電泳分析。若是正向連接載體，電泳圖譜中出現(xiàn)長度為 1.21.2Kb和 5.55.5Kb兩條帶。
（4）利用自身不含lacZ基因且對抗生素敏感的大腸桿菌作為受體細胞，要在已轉化的含重組質粒、已轉化的含空質粒的受體細胞和未轉化成功的細胞中篩選出已轉化的含重組質粒的受體細胞的方法是：在含有 氨芐青霉素和X-gal氨芐青霉素和X-gal的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，形成 白白色菌落的為導入重組質粒的受體細胞。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】基因表達載體的構建；B；有標記基因，復制原點不會被限制酶切割；PvuⅠ；引物；EcoRⅠ；1.2；5.5；氨芐青霉素和X-gal；白
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：33引用：1難度：0.5
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1．下列有關基因工程技術和蛋白質工程技術敘述正確的是（ ）
發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
2．下列有關基因工程的敘述，正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2024/12/31 5:0:5組卷：3引用：2難度：0.7 -
3．幾丁質是許多真菌細胞壁的重要成分，幾丁質酶可催化幾丁質水解。通過基因工程將幾丁質酶基因轉入植物體內，可增強其抗真菌病的能力?；卮鹣铝袉栴}：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得。基因文庫包括和。
（2）生物體細胞內的DNA復制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術擴增目的基因時，使反應體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質酶基因和質粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉基因植株（幾丁質酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6
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