研究者篩選到一株降解纖維素能力較強(qiáng)的枯草芽孢桿菌菌株(B菌),從中獲得一種纖維素酶(C1酶)基因。將C1酶基因與高效表達(dá)載體(HT質(zhì)粒)連接,再導(dǎo)入B菌,以期獲得降解纖維素能力更強(qiáng)的工程菌。熒光定量PCR技術(shù)可定量檢測(cè)樣本中某種DNA含量。其原理是在PCR體系中每加入一對(duì)引物的同時(shí)加入一個(gè)與某條模板鏈互補(bǔ)的熒光探針,當(dāng)Taq酶催化子鏈延伸至探針處,會(huì)水解探針,使熒光監(jiān)測(cè)系統(tǒng)接收到熒光信號(hào),即每擴(kuò)增一次,就有一個(gè)熒光分子生成。在檢測(cè)過程中,隨著PCR的進(jìn)行,反應(yīng)產(chǎn)物不斷累積,“雜交雙鏈”熒光信號(hào)的強(qiáng)度也等比例增加??赏ㄟ^熒光強(qiáng)度的變化監(jiān)測(cè)產(chǎn)物量的變化從而得到一條熒光擴(kuò)增曲線圖(如圖1)。
注:DNA的轉(zhuǎn)錄方向是RNA的合成方向,即5'端到3'端。
回答下列問題:
(1)啟動(dòng)子的基本組成單位是 脫氧核苷酸脫氧核苷酸,能識(shí)別啟動(dòng)子的酶是 RNA聚合酶RNA聚合酶。
(2)熒光定量PCR儀能監(jiān)測(cè)出熒光到達(dá)預(yù)先設(shè)定閾值的循環(huán)數(shù)(Ct值),病毒核酸濃度越高,Ct值越 小小。
(3)“平臺(tái)期”出現(xiàn)的最可能的原因是 試劑盒中的原料、引物和探針數(shù)量一定,超出一定循環(huán)數(shù)后,熒光標(biāo)記的“雜交雙鏈”不再增加試劑盒中的原料、引物和探針數(shù)量一定,超出一定循環(huán)數(shù)后,熒光標(biāo)記的“雜交雙鏈”不再增加。
(4)圖2中HT質(zhì)粒酶切位點(diǎn)如圖所示,C1酶基因以B鏈為轉(zhuǎn)錄模板鏈,克隆C1酶基因時(shí)在其酶切位點(diǎn)1和酶切位點(diǎn)2兩端分別添加 BamHIBamHI和 SmaISmaI,并且二者順序不能調(diào)換的原因是 轉(zhuǎn)錄時(shí)mRNA自身延伸方向是5’→3’,使C1酶基因按照正確的方向與已被酶切的HT質(zhì)粒連接轉(zhuǎn)錄時(shí)mRNA自身延伸方向是5’→3’,使C1酶基因按照正確的方向與已被酶切的HT質(zhì)粒連接。
(5)預(yù)期該工程菌在處理廢棄物以保護(hù)環(huán)境方面可能的應(yīng)用 降解桔桿,減少桔桿燃燒帶來的空氣污染降解桔桿,減少桔桿燃燒帶來的空氣污染。(舉一例)
【考點(diǎn)】DNA片段的擴(kuò)增與電泳鑒定.
【答案】脫氧核苷酸;RNA聚合酶;?。辉噭┖兄械脑?、引物和探針數(shù)量一定,超出一定循環(huán)數(shù)后,熒光標(biāo)記的“雜交雙鏈”不再增加;BamHI;SmaI;轉(zhuǎn)錄時(shí)mRNA自身延伸方向是5’→3’,使C1酶基因按照正確的方向與已被酶切的HT質(zhì)粒連接;降解桔桿,減少桔桿燃燒帶來的空氣污染
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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發(fā)布:2024/6/6 8:0:9組卷:6引用:1難度:0.6
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(3)目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞內(nèi),并在受體細(xì)胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達(dá)的過程稱為
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