如圖是將乙肝病毒表面主蛋白基因HBsAg導(dǎo)入巴斯德畢赤酵母菌生產(chǎn)乙肝疫苗的過程示意圖。巴斯德畢赤酵母菌是一種甲基營養(yǎng)型酵母，能將甲醇作為其唯一碳源，此時AOX1基因受到誘導(dǎo)而表達(dá)，圖中pPIC9K質(zhì)粒上5′AOX1和3′AOX1（TT）分別是基因AOX1的啟動子和終止子。該酵母菌體內(nèi)無天然質(zhì)粒，科學(xué)家改造出了圖1所示質(zhì)粒用作載體，其與目的基因形成的重組質(zhì)粒經(jīng)酶切后可以與酵母菌染色體發(fā)生同源重組，將目的基因整合于染色體中以實現(xiàn)表達(dá)。請回答：
（1）用PCR技術(shù)擴增HBsAg基因時原料是 脫氧核苷酸（dNTP）脫氧核苷酸（dNTP），Taq酶需要 Mg2+Mg2+激活。
（2）為實現(xiàn)HBsAg基因和pPIC9K質(zhì)粒重組，設(shè)計引物時需要在引物的 5’5’端添加相應(yīng)限制酶的識別序列，則在HBsAg基因兩側(cè)的A和B位置添加的堿基序列分別是 TACGTATACGTA、CCTAGGCCTAGG，這樣設(shè)計的優(yōu)點是 避免目的基因反向接入質(zhì)粒（保證目的基因定向接入質(zhì)粒）避免目的基因反向接入質(zhì)粒（保證目的基因定向接入質(zhì)粒）。
（3）酶切獲取HBsAg基因后，需用 T4DNA連接酶T4DNA連接酶（填“E.coliDNA連接酶”或“T4DNA連接酶”）將其連接到pPIC9K質(zhì)粒上，形成重組質(zhì)粒，構(gòu)建重組質(zhì)粒的目的是 讓目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在和遺傳，并使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用讓目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在和遺傳，并使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用。
（4）若用限制酶SnaBⅠ、BglⅡ聯(lián)合酶切pPIC9K質(zhì)粒，獲得的DNA片段的長度分別是38kb、27kb、67kb；用限制酶BglⅡ、AvrⅡ聯(lián)合酶切pPIC9K質(zhì)粒，得到的DNA片段的長度分別是38kb、40kb、54kb；已知HBsAg基因長度是55kb。步驟3中應(yīng)選用限制酶 BglⅡBglⅡ來切割重組質(zhì)粒以獲得重組DNA，切割后的重組DNA的長度是 136kb136kb。
（5）轉(zhuǎn)化的酵母菌在培養(yǎng)基上培養(yǎng)一段時間后，需要向其中加入甲醇，其目的是 誘導(dǎo)HBsAg基因表達(dá)誘導(dǎo)HBsAg基因表達(dá)。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】脫氧核苷酸（dNTP）；Mg2+；5’；TACGTA；CCTAGG；避免目的基因反向接入質(zhì)粒（保證目的基因定向接入質(zhì)粒）；T4DNA連接酶；讓目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在和遺傳，并使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用；BglⅡ；136kb；誘導(dǎo)HBsAg基因表達(dá)
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：2引用：2難度：0.6
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1．下列有關(guān)基因工程技術(shù)和蛋白質(zhì)工程技術(shù)敘述正確的是（ ?。?/h2>
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3．幾丁質(zhì)是許多真菌細(xì)胞壁的重要成分，幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)，可增強其抗真菌病的能力?；卮鹣铝袉栴}：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得?；蛭膸彀?和。
（2）生物體細(xì)胞內(nèi)的DNA復(fù)制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術(shù)擴增目的基因時，使反應(yīng)體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當(dāng)幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學(xué)鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉(zhuǎn)基因植株（幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6
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