普通PCR在擴增DNA的過程中存在一定概率的堿基錯誤配對,得到部分的錯誤產(chǎn)物。巢式PCR是一種在普通PCR基礎(chǔ)上改良的新型PCR技術(shù),擴增的精確性比普通PCR更高。巢式PCR對目標DNA進行擴增時需要用到兩對不同的引物,首先使用第一對引物(外引物)對目標DNA進行第一次擴增得到中間產(chǎn)物,然后使用第二對引物(內(nèi)引物)對中間產(chǎn)物進行第二次擴增得到目標產(chǎn)物,過程如圖所示。請回答相關(guān)問題:
(1)PCR的原理是 DNA的復(fù)制DNA的復(fù)制,PCR反應(yīng)體系一般都需要加入一定量的,其作用是 激活DNA聚合酶激活DNA聚合酶。
(2)巢式PCR通常在第一支試管中進行第一次擴增,然后把得到的中間產(chǎn)物分離出來轉(zhuǎn)移到另外一支試管中進行第二次擴增反應(yīng),兩次擴增不在同一支試管中擴增的原因是 防止內(nèi)引物直接參與第一次的擴增,無法實現(xiàn)巢式PCR高精確性擴增的目的防止內(nèi)引物直接參與第一次的擴增,無法實現(xiàn)巢式PCR高精確性擴增的目的。使用瓊脂糖凝膠電泳對模板DNA與中間產(chǎn)物分離時,由于中間產(chǎn)物的分子量較小,所以相同時間內(nèi)在凝膠中的遷移距離更 大大。
(3)如果巢式PCR第一次擴增得到的某中間產(chǎn)物的部分堿基發(fā)生了替換,則第二次擴增時內(nèi)引物與該中間產(chǎn)物配對并擴增的概率 降低降低。如果想進一步減少錯誤目標產(chǎn)物的產(chǎn)生,還可以適當 提高提高(填“提高”或“降低”)復(fù)性的溫度。
【考點】DNA片段的擴增與電泳鑒定.
【答案】DNA的復(fù)制;激活DNA聚合酶;防止內(nèi)引物直接參與第一次的擴增,無法實現(xiàn)巢式PCR高精確性擴增的目的;大;降低;提高
【解答】
【點評】
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發(fā)布:2024/4/20 14:35:0組卷:6引用:2難度:0.5
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