隨著奮斗生物學(xué)的發(fā)展，Red同源重組技術(shù)已廣泛應(yīng)用于大腸桿菌基因工程研究。該技術(shù)可以對(duì)大腸桿菌中DNA分子的任意位置進(jìn)行基因敲除、敲入、點(diǎn)突變等操作，大大推動(dòng)了基因工程的發(fā)展。質(zhì)粒pKD46是目前應(yīng)用最廣泛的Red同源重組基因敲除載體，含有溫度敏感型的復(fù)制起點(diǎn)oriR101，在30℃培養(yǎng)時(shí)可以正常復(fù)制，而高于37℃時(shí)會(huì)自動(dòng)丟失；該質(zhì)粒還含有來(lái)自λ噬菌體的exo、bet、gam三個(gè)基因，分別編碼EXO、BET、GAM三種蛋白質(zhì)，需要L-阿拉伯糖的誘導(dǎo)才能表達(dá)并用于大腸桿菌等工程菌的基因敲除。λ-Red系統(tǒng)介導(dǎo)的基因敲除過(guò)程如圖1所示。請(qǐng)回答下列問(wèn)題：
（1）EXO為雙鏈核酸外切酶，可以結(jié)合在雙鏈DNA的末端，從5'向3'降解DNA單鏈產(chǎn)生 3′3′（填“3′”或“5′”）黏性末端；BEF結(jié)合在EXO外切產(chǎn)生的末端單鏈上，促進(jìn)其與受體細(xì)胞的氫序列進(jìn)行同源重組，替換靶基因；GAM蛋白能夠抑制受體細(xì)胞內(nèi)核酸外切酶活性，進(jìn)而 抑制抑制（填“抑制”或“促進(jìn)”）受體細(xì)胞對(duì)外源DNA的降解。
（2）要將pKD46導(dǎo)入大腸桿菌，首先需用Ca2+處理大腸桿菌，目的是 使大腸桿菌處于感受態(tài)，處于一種能吸收周圍環(huán)境中DNA分子的生理狀態(tài)使大腸桿菌處于感受態(tài)，處于一種能吸收周圍環(huán)境中DNA分子的生理狀態(tài)。為使pKD46在細(xì)菌內(nèi)正常復(fù)制、Red重組酶正常合成，必須滿足的培養(yǎng)條件是 培養(yǎng)溫度為30℃且培養(yǎng)基中含L-阿拉伯糖培養(yǎng)溫度為30℃且培養(yǎng)基中含L-阿拉伯糖。過(guò)程Ⅰ是用含有青霉素的培養(yǎng)基篩選成功導(dǎo)入了pKB46的尖腸桿菌，說(shuō)明 大腸桿菌不含青霉素抗性基因，pKD46中含青霉素抗性基因大腸桿菌不含青霉素抗性基因，pKD46中含青霉素抗性基因。
（3）利用PCR技術(shù)可獲取卡那霉素抗性基因，要獲取大量卡那霉素抗性基因，應(yīng)選擇圖2中的引物 Ⅱ、ⅢⅡ、Ⅲ。引物內(nèi)部及兩種引物之間不能存在 堿基互補(bǔ)配對(duì)堿基互補(bǔ)配對(duì)的序列，避免引物通過(guò)折疊形成雙鏈區(qū)或引物之間形成雙鏈區(qū)。
（4）為了篩選出同源重組成功的大腸桿菌，應(yīng)將大腸桿菌培養(yǎng)在含有 卡那霉素卡那霉素的培養(yǎng)基上，然后再通過(guò)在 高于（大于）37℃的溫度高于（大于）37℃的溫度條件下培養(yǎng)、把質(zhì)粒pKD46除去。
【考點(diǎn)】基因工程的操作過(guò)程綜合．
【答案】3′；抑制；使大腸桿菌處于感受態(tài)，處于一種能吸收周圍環(huán)境中DNA分子的生理狀態(tài)；培養(yǎng)溫度為30℃且培養(yǎng)基中含L-阿拉伯糖；大腸桿菌不含青霉素抗性基因，pKD46中含青霉素抗性基因；Ⅱ、Ⅲ；堿基互補(bǔ)配對(duì)；卡那霉素；高于（大于）37℃的溫度
【解答】
【點(diǎn)評(píng)】
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發(fā)布：2024/5/8 8:0:8組卷：6引用：1難度：0.6
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1．下列有關(guān)基因工程技術(shù)和蛋白質(zhì)工程技術(shù)敘述正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：6引用：1難度：0.7 -
2．下列有關(guān)基因工程的敘述，正確的是（ ?。?/h2>
發(fā)布：2024/12/31 5:0:5組卷：3引用：2難度：0.7 -
3．幾丁質(zhì)是許多真菌細(xì)胞壁的重要成分，幾丁質(zhì)酶可催化幾丁質(zhì)水解。通過(guò)基因工程將幾丁質(zhì)酶基因轉(zhuǎn)入植物體內(nèi)，可增強(qiáng)其抗真菌病的能力?；卮鹣铝袉?wèn)題：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫(kù)中獲得。基因文庫(kù)包括和。
（2）生物體細(xì)胞內(nèi)的DNA復(fù)制開始時(shí)，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因時(shí)，使反應(yīng)體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個(gè)解鏈過(guò)程的共同點(diǎn)是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個(gè)DNA片段連接起來(lái)的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當(dāng)幾丁質(zhì)酶基因和質(zhì)粒載體連接時(shí)，DNA連接酶催化形成的化學(xué)鍵是。
（4）提取RNA時(shí)，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉(zhuǎn)基因植株（幾丁質(zhì)酶基因已經(jīng)整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6