草甘膦是世界上使用最廣泛的除草劑，轉EPSPS基因抗除草劑水稻是中國科學院遺傳與發(fā)育生物學研究所研發(fā)的水稻品種，靶標對象為草甘膦。回答下列問題：
（1）EPSPS基因一條鏈的兩端序列如圖1。
采用PCR技術獲取和擴增EPSPS基因，需要使用的引物序列為 5'-CTTGGATGAT-3'和5'-TCTGTTGAAT-3'5'-CTTGGATGAT-3'和5'-TCTGTTGAAT-3'（標出5′和3′端）。若PCR過程經過4次循環(huán)，需要的引物的數(shù)量為 3030個。
（2）如表為操作過程中可能用到的限制酶，圖2為經切割得到的目的基因及末端（除黏性末端序列外，其他堿基序列省略），圖3為要使用的質粒，其中的Tetr、Ampr為標記基因。
| 限制酶 | BamHⅠ | BclⅠ | SmaⅠ | Sau3AⅠ |
| 識別位點及切割位點 | -G↓GATCC- | -T↓GATCG- | -CCC↓GGG- | -↓GATC- |
農桿菌轉化法
農桿菌轉化法
，作為表達載體，除圖中結構，未標注的結構為 啟動子
啟動子
。對質粒進行切割時，選用的兩種酶為 BclⅠ和SmaⅠ
BclⅠ和SmaⅠ
。（3）植物激素是植物體內產生，能從產生部位運送到作用部位，對植物的
生長發(fā)育有顯著影響
生長發(fā)育有顯著影響
的微量有機物，將導入EPSPS基因的細胞進行組織培養(yǎng)時，所用培養(yǎng)基中需要添加植物激素，若要探究生長素和細胞分裂素的比例（比值為1、比值大于1、比值小于1）對培養(yǎng)結果產生的影響。實驗思路為 取4組已滅菌的裝有MS培養(yǎng)基的錐形瓶，不同組別培養(yǎng)基的差異為不添加任何植物激素，生長素用量與細胞分裂素用量的比值為1，比值大于1以及比值小于1，其他條件相同且適宜，觀察外植體的生長發(fā)育情況
取4組已滅菌的裝有MS培養(yǎng)基的錐形瓶，不同組別培養(yǎng)基的差異為不添加任何植物激素，生長素用量與細胞分裂素用量的比值為1，比值大于1以及比值小于1，其他條件相同且適宜，觀察外植體的生長發(fā)育情況
。【答案】5'-CTTGGATGAT-3'和5'-TCTGTTGAAT-3'；30；農桿菌轉化法；啟動子；BclⅠ和SmaⅠ；生長發(fā)育有顯著影響；取4組已滅菌的裝有MS培養(yǎng)基的錐形瓶，不同組別培養(yǎng)基的差異為不添加任何植物激素，生長素用量與細胞分裂素用量的比值為1，比值大于1以及比值小于1，其他條件相同且適宜，觀察外植體的生長發(fā)育情況
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/4/20 14:35:0組卷：21引用：2難度：0.7
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3．幾丁質是許多真菌細胞壁的重要成分，幾丁質酶可催化幾丁質水解。通過基因工程將幾丁質酶基因轉入植物體內，可增強其抗真菌病的能力。回答下列問題：
（1）基因工程中所用的目的基因可以人工合成，也可以從基因文庫中獲得?；蛭膸彀?和。
（2）生物體細胞內的DNA復制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術擴增目的基因時，使反應體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質酶基因和質粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
（4）提取RNA時，提取液中需添加RNA酶抑制劑，其目的是。
（5）若獲得的轉基因植株（幾丁質酶基因已經整合到植物的基因組中）抗真菌病的能力沒有提高，根據(jù)中心法則分析，其可能的原因是。發(fā)布：2025/1/5 8:0:1組卷：2引用：2難度：0.6
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