如圖是A基因的部分片段和載體的部分結構,科研人員欲將A基因的啟動子連接在圖示載體中,進而使載體上的熒光蛋白基因得到表達。圖中標記了A基因的部分片段、載體部分結構中的限制酶酶切位點及五種限制酶的識別序列和切割位點,回答下列問題:
(1)A基因部分片段中R、F表示擴增啟動子所用的 引物引物,其作用是 使DNA聚合酶能夠從引物的3'端開始連接脫氧核苷酸使DNA聚合酶能夠從引物的3'端開始連接脫氧核苷酸。
(2)A基因的轉錄方向為 從左向右從左向右(填“從左向右”或“從右向左”),熒光蛋白基因的轉錄方向為 從右向左從右向左(填“從左向右”或“從右向左”),因此將A基因的啟動子連接到載體之前應在F的 5'5'(填“3'”或“5'”)端連接五種酶中 SalⅠSalⅠ酶的識別序列,不選擇連接Xho I酶的理由是 用XhoⅠ切割A基因啟動子獲得黏性末端時會破壞A基因的啟動子用XhoⅠ切割A基因啟動子獲得黏性末端時會破壞A基因的啟動子。
(3)為完成科研人員的設想,除需使用F處添加的序列所對應的酶外,構建和擴增基因表達載體的過程還需用到 55種酶,分別是 EcoRⅠ、MunⅠ、XhoⅠ、TaqDNA聚合酶(耐高溫的DNA聚合酶)、DNA連接酶EcoRⅠ、MunⅠ、XhoⅠ、TaqDNA聚合酶(耐高溫的DNA聚合酶)、DNA連接酶。
【考點】基因工程的操作過程綜合;DNA片段的擴增與電泳鑒定.
【答案】引物;使DNA聚合酶能夠從引物的3'端開始連接脫氧核苷酸;從左向右;從右向左;5';SalⅠ;用XhoⅠ切割A基因啟動子獲得黏性末端時會破壞A基因的啟動子;5;EcoRⅠ、MunⅠ、XhoⅠ、TaqDNA聚合酶(耐高溫的DNA聚合酶)、DNA連接酶
【解答】
【點評】
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