乳酸菌無氧呼吸過程中，第一階段產生的丙酮酸會在LDH的催化下產生乳酸，科學家通過改造乳酸脫氫酶（LDH），能夠高效地生產高純度的苯乳酸。
（1）科學家擬改造LDH基因成為mLDH基因，需將LDH第52位的酪氨酸替換為亮氨酸，使得活性中心增大，可用于生產苯乳酸。
①先將LDH基因片段連入載體中，形成環(huán)狀質粒，如圖1。
將突變后的序列設計在引物1中，以環(huán)狀質粒為PCR的 模板模板，再向體系中加入四種脫氧核苷酸（dNTP）、TaqTaq酶、引物2引物2以及堿基替換后的引物進行擴增LDH基因，PCR產物的序列便引入了預期的突變。下列引物序列中符合引物1要求的有 AA、DD。
A．5'-TGACTGACTAACACTCGGAC-3'
B．5'-TGACTGACAACCACTCGGAC-3'
C．5'-TGACTGACGATCACTCGGAC-3'
D．5'-TGACTGACGAGCACTCGGAC-3'
②上述PCR產物為 鏈鏈狀DNA分子，改造后的LDH基因序列位于PCR產物的兩側，需要用 DNA連接DNA連接酶將產物兩端連接，獲得含有mLDH基因的質粒。
（2）產生苯乳酸的過程還需FDH酶參與，現(xiàn)需要構建同時含有mLDH、FDH的基因表達載體。根據(jù)圖2信息，先用限制酶 NdeⅠNdeⅠ和 XhoⅠXhoⅠ切割 質粒2質粒2（質粒1/質粒2）和空載體，將兩種酶切產物連接獲得連接產物，再酶切另一質粒和上一步中的連接產物，連接獲得基因表達載體。
（3）上述科學實踐屬于生物工程中的 蛋白質蛋白質工程。
【考點】基因工程的操作過程綜合．
【答案】模板；Taq；引物2；A；D；鏈；DNA連接；NdeⅠ；XhoⅠ；質粒2；蛋白質
【解答】
【點評】
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發(fā)布：2024/6/27 10:35:59組卷：27引用：1難度：0.7
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（2）生物體細胞內的DNA復制開始時，解開DNA雙鏈的酶是。在體外利用PCR技術擴增目的基因時，使反應體系中的模板DNA解鏈為單鏈的條件是。上述兩個解鏈過程的共同點是破壞了DNA雙鏈分子中的。
（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有和，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是。當幾丁質酶基因和質粒載體連接時，DNA連接酶催化形成的化學鍵是。
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