玉米（2n=20）是我國(guó)栽培面積最大的作物。為使其獲得抗除草劑性狀，獲得抗除草劑轉(zhuǎn)基因玉米自交系A(chǔ)，技術(shù)路線如圖。

（1）為防止酶切產(chǎn)物自身環(huán)化，構(gòu)建表達(dá)載體需用2種限制酶，選擇的原則是

A

A

（單選）。
①Ti質(zhì)粒內(nèi)，每種限制酶只有一個(gè)切割位點(diǎn)
②G基因編碼蛋白質(zhì)的序列中，每種限制酶只有一個(gè)切割位點(diǎn)
③酶切后，G基因形成的兩個(gè)黏性末端序列不相同
④酶切后，Ti質(zhì)粒形成的兩個(gè)黏性末端序列相同
A．①③B．①④C．②③D．②④
（2）質(zhì)粒載體作為基因工程的工具，應(yīng)具備的基本條件有

復(fù)制原點(diǎn)和酶切位點(diǎn)

復(fù)制原點(diǎn)和酶切位點(diǎn)

（答出兩點(diǎn)即可）。
而作為基因表達(dá)載體，除滿足上述基本條件外，還需具有

啟動(dòng)子和終止子

啟動(dòng)子和終止子

（答出兩點(diǎn)即可）。
（3）如表是4種玉米自交幼胚組織培養(yǎng)不同階段的結(jié)果。據(jù)表可知，細(xì)胞脫分化時(shí)使用的激素是

2，4-D

2，4-D

，自交系

乙

乙

的幼胚最適合培養(yǎng)成愈傷組織作為轉(zhuǎn)化受體。

激素 結(jié)果 自交系	2，4-D（2.0mg/L）	6-BA（0.5mg/L）	IBA（2.0mg/L）
	愈傷組織形成率（%）	芽的分化率（%）	根的誘導(dǎo)率（%）
甲	99	13	90
乙	85	80	87
丙	88	83	12
丁	16	85	83

（4）常用Ca²⁺處理土壤農(nóng)桿菌，其目的是

提高受體細(xì)胞的轉(zhuǎn)化率

提高受體細(xì)胞的轉(zhuǎn)化率

。農(nóng)桿菌的T-DNA攜帶插入其內(nèi)的片段轉(zhuǎn)移到受體細(xì)胞的

染色體DNA

染色體DNA

上。篩選轉(zhuǎn)化的愈傷組織，需使用含

除草劑

除草劑

的選擇培養(yǎng)基。
（5）轉(zhuǎn)化過程中，愈傷組織表面常殘留農(nóng)桿菌，導(dǎo)致未轉(zhuǎn)化愈傷組織隔壁可能在選擇培養(yǎng)基上生長(zhǎng)。含有內(nèi)含子的報(bào)告基因只能在真核生物中正確表達(dá)，其產(chǎn)物能催化無色物質(zhì)K呈現(xiàn)藍(lán)色。用K分別處理以下愈傷組織，出現(xiàn)藍(lán)色的是

BD

BD

（多選）。
A．無農(nóng)桿菌附著的未轉(zhuǎn)化愈傷組織
B．無農(nóng)桿菌附著的轉(zhuǎn)化愈傷組織
C．農(nóng)桿菌附著的未轉(zhuǎn)化愈傷組織
D．農(nóng)桿菌附著的轉(zhuǎn)化愈傷組織
（6）組織培養(yǎng)獲得的轉(zhuǎn)基因植株（核DNA中僅插入一個(gè)G基因）進(jìn)行自交，在子代含G基因的植株中，純合子占

1

3

1

3

。繼續(xù)篩選，最終選育出抗除草劑純合自交系A(chǔ)。
（7）如表是鑒定含G基因植株的4種方法。請(qǐng)預(yù)測(cè)同一后代群體中，4種方法檢出的含G基因植株的比例，從小到大依次是

X4，X3，X2，X1

X4，X3，X2，X1

。

方法	檢測(cè)對(duì)象	檢測(cè)目標(biāo)	檢出的含G基因植株的比例
PCR擴(kuò)增	基因組DNA	G基因	X1
分子雜交	總mRNA	G基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物	X2
抗原-抗體雜交	總蛋白質(zhì)	G基因編碼的蛋白質(zhì)	X3
噴灑除草劑	幼苗	抗除草劑幼苗	X4