纖毛是廣泛存在的細胞表面結構,功能異??梢鸲喾N疾病。因此,研究纖毛形成的作用機制具有重要意義。請回答下列問題。
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(1)纖毛結構如圖1所示,由細胞膜延伸形成的纖毛膜主要由中心體轉(zhuǎn)變而來,中心體在有絲分裂中的功能是 參與紡錘體的形成,是紡錘體形成中心參與紡錘體的形成,是紡錘體形成中心。
(2)某病人腎小管上皮細胞纖毛異常,為了分析纖毛相關基因X是否發(fā)生了變異,對基因X進行了PCR擴增與產(chǎn)物測序。從細胞樣品中分離DNA時,可通過交替調(diào)節(jié)鹽濃度將與核蛋白結合的DNA分離出來,溶液中添加NaCl至2.0mo1/L的目的是 溶解DNA溶解DNA。PCR擴增時,需在 耐高溫DNA聚合酶耐高溫DNA聚合酶催化下,在引物 3'3'端進行DNA鏈的延伸,獲得擴增產(chǎn)物用于測序。
(3)為研究蛋白質(zhì)X在細胞中的定位,構建綠色熒光蛋白GFP與X的融合蛋白,融合蛋白具有綠色熒光,可示其在細胞內(nèi)位置。將X-GFP基因融合片段M導入如圖Ⅱ所示載體質(zhì)粒Y,構建Y-M重組質(zhì)粒(在EcoRV位點插入片段)。請完成如表。
分步實驗目標 | 簡易操作、結果、分析 |
PCR鑒定正向重組質(zhì)粒Y-M(圖Ⅱ中融合片段M中有白色的箭頭,代表方向) | ①選擇圖Ⅱ引物 a、b a、b ;②PCR目的產(chǎn)物約為 1100 1100 bp。 |
確保M及連接處序列正確,Y-M的連接處上游含有HindⅢ+ECoRⅤ的識別序列,下游含有EcoRⅤ+BamHⅠ的識別序列 | ③質(zhì)粒測序,圖Ⅲ中正確的是 Q4 Q4 (選填序列編號) |
檢測融合蛋白定位 | ④對照質(zhì)粒Y-GFP(僅表達GFP)與實驗質(zhì)粒Y-M分別導入細胞,發(fā)現(xiàn)對照組整個細胞均有綠色熒光,而實驗組熒光集中在纖毛基部,說明X蛋白參與 中心體 中心體 的形成。 |
逆轉(zhuǎn)錄
逆轉(zhuǎn)錄
形成cDNA作為模板,PCR擴增結果顯示,在總cDNA模板量相等的條件下,健康人Ct值為15,而病人Ct值為20(Ct值是產(chǎn)物熒光強度達到設定閾值時的PCR循環(huán)數(shù))。【考點】DNA片段的擴增與電泳鑒定;各類細胞器的結構和功能.
【答案】參與紡錘體的形成,是紡錘體形成中心;溶解DNA;耐高溫DNA聚合酶;3';a、b;1100;Q4;中心體;逆轉(zhuǎn)錄
【解答】
【點評】
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發(fā)布:2024/4/24 14:0:35組卷:23引用:1難度:0.5
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A.選擇受精卵作為外源基因的受體細胞是因為這種細胞的全能性最容易表達
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