常用的PCR技術(shù)有實(shí)時(shí)熒光定量PCR、RT-PCR、重疊延伸PCR等，其中重疊延伸PCR技術(shù)是一種通過寡聚核苷酸鏈之間重疊的部分互相搭橋、互為模板，通過多次PCR擴(kuò)增，從而獲得目的基因的方法。該技術(shù)在擴(kuò)增較長片段的DNA、不同來源的DNA片段拼接、基因的定點(diǎn)誘變等方面具有廣泛的應(yīng)用前景。利用重疊延伸PCR技術(shù)進(jìn)行定點(diǎn)突變可以實(shí)現(xiàn)對纖維素酶基因進(jìn)行合理改造，其過程如圖1所示?；卮鹣铝袉栴}：

（1）PCR定點(diǎn)突變需要設(shè)計(jì)的引物是

引物b、引物c

引物b、引物c

；②過程獲得突變產(chǎn)物AD，需要使用的引物是

引物a和引物d

引物a和引物d

。
（2）在第一階段為獲得產(chǎn)物AB和產(chǎn)物CD，必須將引物a、b和引物c、d置于不同反應(yīng)系統(tǒng)中，這是因?yàn)?!--BA-->

引物b和引物c對應(yīng)的堿基之間多數(shù)可以配對，在一個(gè)反應(yīng)系統(tǒng)中配對后失效

引物b和引物c對應(yīng)的堿基之間多數(shù)可以配對，在一個(gè)反應(yīng)系統(tǒng)中配對后失效

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（3）新冠病毒常用“熒光RT-PCR技術(shù)”進(jìn)行檢測。
①“熒光RT-PCR技術(shù)”所用的試劑盒中通常都應(yīng)該含有

逆（反）轉(zhuǎn)錄酶、熱穩(wěn)定性DNA聚合酶（Taq酶）

逆（反）轉(zhuǎn)錄酶、熱穩(wěn)定性DNA聚合酶（Taq酶）

、熒光標(biāo)記的核酸探針、引物、dNTP、緩沖體系。
②用

用微量移液器

用微量移液器

向微量離心管中依次加入各組分，稍微進(jìn)行

離心

離心

，使反應(yīng)液集中在微量離心管底部，將微量離心管放入PCR儀設(shè)計(jì)好PCR儀的循環(huán)程序，進(jìn)行PCR反應(yīng)。
（4）在檢測過程中，隨著PCR的進(jìn)行，反應(yīng)產(chǎn)物不斷累積，“雜交雙鏈”熒光信號(hào)的強(qiáng)度也等比例增加。可通過熒光強(qiáng)度的變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化從而得到一條熒光擴(kuò)增曲線圖。
①“平臺(tái)期”出現(xiàn)的最可能的原因是

試劑盒中的原料、引物和探針數(shù)量一定，超出一定的循環(huán)數(shù)后，熒光標(biāo)記的“雜交雙鏈”不再增加

試劑盒中的原料、引物和探針數(shù)量一定，超出一定的循環(huán)數(shù)后，熒光標(biāo)記的“雜交雙鏈”不再增加

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②理論上，在檢測過程中有熒光標(biāo)記的“雜交雙鏈”出現(xiàn)，則說明檢測結(jié)果呈

陽

陽

（填“陰”或“陽”）性，但為了保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性，一般要達(dá)到或超過閾值時(shí)才確診。現(xiàn)有兩個(gè)待檢樣本，檢測時(shí)都出現(xiàn)了上述形態(tài)的曲線，但甲的a點(diǎn)比乙的a點(diǎn)明顯左移。請給這種結(jié)果做出科學(xué)合理的解釋（試劑盒合格且正常，操作過程規(guī)范且準(zhǔn)確）：

甲樣本中的新冠病毒含量更高達(dá)到閾值所需的循環(huán)數(shù)更少

甲樣本中的新冠病毒含量更高達(dá)到閾值所需的循環(huán)數(shù)更少

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