普通酵母菌利用淀粉的效率較低。研究人員將某海洋細(xì)菌中α-淀粉酶分子（B）基因轉(zhuǎn)入酵母菌中，經(jīng)篩選得到了可高效利用淀粉的工程酵母菌菌種。請(qǐng)回答下列問題：
（1）采用PCR技術(shù)擴(kuò)增B基因。圖中箭頭表示一條引物結(jié)合模板的位置及擴(kuò)增方向，請(qǐng)用箭頭在方框內(nèi)標(biāo)出另一條引物的位置及擴(kuò)增方向。為使PCR產(chǎn)物能被限制酶切割，需在引物上添加相應(yīng)的限制酶識(shí)別序列，該限制酶識(shí)別序列應(yīng)添加在引物的

5'端

5'端

（3′端/5′端）。
（2）通常需提取大腸桿菌的質(zhì)粒用來構(gòu)建B基因的表達(dá)載體。提取的主要步驟是培養(yǎng)大腸桿菌→裂解菌體→質(zhì)粒DNA的復(fù)性→離心提取→鑒定。在裂解菌體時(shí)需添加溶液（主要成分為EDTA）、溶液Ⅰ（主要成分為SDS），添加順序是先加

溶液Ⅰ

溶液Ⅰ

，5min后再加

溶液Ⅱ

溶液Ⅱ

。在所提取的質(zhì)粒上還需添加

酵母菌

酵母菌

（海洋細(xì)菌/大腸桿菌/酵母菌）的啟動(dòng)子、終止子等。
（3）在將B基因?qū)虢湍讣?xì)胞前，需先將酵母菌置于含醋酸鋰的培養(yǎng)液中培養(yǎng)一段時(shí)間，從而提高轉(zhuǎn)化效率。由此推測(cè)，醋酸鋰的培養(yǎng)液可用于制備

感受態(tài)酵母菌

感受態(tài)酵母菌

。
（4）用B抗體檢測(cè)該工程菌的培養(yǎng)物時(shí)，培養(yǎng)液無抗原抗體反應(yīng)，菌體有抗原抗體反應(yīng)。這為分離、純化B蛋白提供的啟示是

在用該工程菌進(jìn)行工業(yè)發(fā)酵時(shí)，應(yīng)從菌體中分離、純化B蛋白

在用該工程菌進(jìn)行工業(yè)發(fā)酵時(shí)，應(yīng)從菌體中分離、純化B蛋白

。以淀粉為原料，用工程酵母菌和普通酵母菌在相同的適宜條件下密閉發(fā)酵，接種了工程酵母菌的發(fā)酵罐需要率先排氣，其原因是

工程酵母菌分解淀粉產(chǎn)生葡萄糖的能力強(qiáng)，導(dǎo)致酒精發(fā)酵產(chǎn)生CO₂速率更快

工程酵母菌分解淀粉產(chǎn)生葡萄糖的能力強(qiáng)，導(dǎo)致酒精發(fā)酵產(chǎn)生CO₂速率更快

。
（5）如果將B的絲氨酸變成亮氨酸，改變后的α-淀粉酶分子（B）不但保留B的功能，而且具更高的催化活性。以B基因序列為基礎(chǔ)，獲得B₁基因的途徑有修飾

B

B

基因或合成

B₁

B₁

基因。