研究發(fā)現(xiàn)，實體腫瘤內部通常是缺氧的環(huán)境，蓖麻毒素蛋白（RTA）可作用于核糖體，使蛋白合成受阻，從而引起細胞死亡。TAT是一種短肽，可轉導蛋白進入細胞，含有氧依賴性降解區(qū)域ODD（多肽）的融合蛋白可以適應低氧條件穩(wěn)定存在，但在常氧條件下會被蛋白酶降解?？蒲腥藛T以RTA作為抑制腫瘤細胞增殖的活性分子，利用TAT的作用將融合蛋白轉運進入腫瘤細胞，并利用ODD的作用減輕RTA對正常細胞的毒性，分別構建了含TAT-RTA（660bp）和TAT-RTA-ODD（870bp）融合基因的表達載體，并成功得到相關融合蛋白。
（1）可采用PCR的方法獲取融合基因TAT-RTA，需要根據(jù)TAT和RTA基因設計引物，引物的作用是

與模板DNA單鏈互補配對實現(xiàn)連接，并且使DNA聚合酶能夠從引物的3'端開始連接脫氧核苷酸

與模板DNA單鏈互補配對實現(xiàn)連接，并且使DNA聚合酶能夠從引物的3'端開始連接脫氧核苷酸

。已知RTA基因和欲得到的TAT-RTA融合基因的結構如圖1所示，TAT基因編碼鏈序列5'ATGAGCTACGGCCGTAAAAAGAGACGCCAACGTAGA3′，為順利構建表達載體，需要在引物1的5′端加入

BamHⅠ

BamHⅠ

酶切位點，引物2的5′端加入

XboⅠ

XboⅠ

酶切位點，利用TAT和RTA核酸序列設計引物時，要求在RTA蛋白的前端引入TAT短肽，請根據(jù)要求寫出引物1

5'GGATCCATGAGC3'

5'GGATCCATGAGC3'

（寫出引物5′端的12個堿基即可）。

（2）載體的部分結構如圖2所示，His標簽由連續(xù)的6個組氨酸構成，可用于對重組融合蛋白進行分離純化，將PCR得到的TAT-RTA融合基因和載體雙酶切后，再用

DNA連接

DNA連接

酶連接。但是在研究時，發(fā)現(xiàn)融合蛋白中沒有His標簽蛋白，據(jù)圖分析原因是

限制酶2識別序列后面的一個堿基A與His標簽基因編碼鏈的前兩個堿基CA編碼一個氨基酸，導致His標簽基因對應的mRNA的密碼子被錯位讀取

限制酶2識別序列后面的一個堿基A與His標簽基因編碼鏈的前兩個堿基CA編碼一個氨基酸，導致His標簽基因對應的mRNA的密碼子被錯位讀取

?？赏ㄟ^引物2的特殊設計使His標簽正常表達，請結合圖1和圖2寫出引物2

5'CTCGAGTAGAACTGGCTGCTCGGCGG3'

5'CTCGAGTAGAACTGGCTGCTCGGCGG3'

（引物中如需添加堿基補足對應的密碼子，可以添加任意堿基）。
（3）科研人員將得到的重組融合蛋白經(jīng)腹腔給藥荷瘤小鼠（患實體腫瘤的小鼠稱為荷瘤小鼠），研究荷瘤小鼠腫瘤體積變化，結果如圖3所示，
請寫出本實驗的結果

TAT-RTA和TAT-RTA-ODD融合蛋白都可以抑制荷瘤小鼠腫瘤體積的增長，TAT-RTA-ODD融合蛋白的抑制效果更好

TAT-RTA和TAT-RTA-ODD融合蛋白都可以抑制荷瘤小鼠腫瘤體積的增長，TAT-RTA-ODD融合蛋白的抑制效果更好

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產生該實驗結果的原因是

含有氧依賴性降解區(qū)域ODD（多肽）的融合蛋白可以適應腫瘤內部低氧條件穩(wěn)定存在，從而更好地抑制腫瘤體積增長

含有氧依賴性降解區(qū)域ODD（多肽）的融合蛋白可以適應腫瘤內部低氧條件穩(wěn)定存在，從而更好地抑制腫瘤體積增長

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