如圖所示為A,B、C三種質粒和一個含目的基因D的DNA片段示意圖。圖中Ap為氨芐青霉素抗性基因,Tc為四環(huán)素抗性基因,lacZ為藍色顯色基因,EcoRⅠ,PvuⅠ為兩種限制酶,質粒上限制酶括號內的數字表示限制酶切割位點與復制原點的距離?;卮鹣铝袉栴}:
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(1)據圖分析質粒A、C一般不能作為運載體的理由分別是 (質粒A)缺少標記基因(質粒A)缺少標記基因、(質粒A)缺少標記基因、(質粒C)復制原點會被限制酶切割(質粒A)缺少標記基因、(質粒C)復制原點會被限制酶切割。若要獲取目的基因,應該選用 PvuⅠPvuⅠ酶切割。
(2)將圖中的目的基因與質粒B進行重組。在基因工程的操作過程中,需要檢查目的基因是否重組到質粒中,應使用 EcoRⅠEcoRⅠ酶切重組質粒,完全酶切后,進行電泳檢測。若電泳圖譜中出現長度為1.1kb和5.6kb,或者 3.13.1kb和 3.63.6kb的片段,則可判斷該重組質粒已與目的基因重組成功(重組質粒上目的基因的插入位點與EcoRⅠ的識別位點之間的堿基對忽略不計)。
(3)若選擇自身不含lacZ基因并對抗生素敏感的大腸桿菌作為受體細胞,則如何篩選成功導入重組質粒的受體細胞?在含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基上培養(yǎng)經過導入處理的大腸桿菌,能形成白色菌落的即為導入重組質粒的大腸桿菌在含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基上培養(yǎng)經過導入處理的大腸桿菌,能形成白色菌落的即為導入重組質粒的大腸桿菌。目的基因能在大腸桿菌細胞內表達出相同的蛋白質,其遺傳學基礎是 自然界的生物共用一套遺傳密碼子自然界的生物共用一套遺傳密碼子。
【考點】基因工程的操作過程綜合.
【答案】(質粒A)缺少標記基因;(質粒A)缺少標記基因、(質粒C)復制原點會被限制酶切割;PvuⅠ;EcoRⅠ;3.1;3.6;在含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基上培養(yǎng)經過導入處理的大腸桿菌,能形成白色菌落的即為導入重組質粒的大腸桿菌;自然界的生物共用一套遺傳密碼子
【解答】
【點評】
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